引言

胰蛋白酶由于其能夠特異性酶解精氨酸和賴氨酸羧基端，是基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的蛋白酶。

胰蛋白酶切割胰島素原生成胰島素，在胰島素的生產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用，但由于胰蛋白酶對(duì)賴氨酸和精氨酸的切割選擇性差別不大，會(huì)在切割反應(yīng)中產(chǎn)生副產(chǎn)物以豬源胰蛋白酶基因?yàn)槟０澹�克隆擴(kuò)增胰蛋白酶原(TgM)基因，將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌，構(gòu)建含TgM基因的工程菌株并誘導(dǎo)表達(dá)，菌液經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)破碎，收集破碎后菌液，經(jīng)提純后得到胰蛋白酶原液，用于后續(xù)酶活測(cè)定等試驗(yàn)。

本研究中，菌體破碎使用的是高壓均質(zhì)機(jī)，可將工程菌株破碎率提升，*后得到較高濃度的蛋白溶液。

實(shí)驗(yàn)步驟：

準(zhǔn)備高壓均質(zhì)機(jī)GSL-5（定制17ml處理量帶在線排氣）1臺(tái)、標(biāo)配款冷水機(jī)1臺(tái)。

收集大腸桿菌樣品進(jìn)行儀器上機(jī)前處理.

清洗儀器，倒入處理后的大腸桿菌樣品；壓力調(diào)大800-1000bar處理3-4遍。

壓力歸零，收集均質(zhì)后的樣品。

實(shí)驗(yàn)前后對(duì)比圖：

用紫外分光光度法檢測(cè)酶活力，并將*終純化獲得的突變胰蛋白酶用于后續(xù)與胰島素原相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1、注意GSL-15帶在線排氣*小處理量，控制好樣本進(jìn)樣量。

2、大腸桿菌在均質(zhì)時(shí)排空會(huì)有較多氣泡屬于正常情況。