大腸桿菌破壁的方法

①酶解法：酶解法是實驗室普遍使用的大腸桿菌破壁的方法，溶菌酶可以直接對大腸桿菌破壁，但酶的使用較為昂貴，增添了成本，同時溶菌酶的存在可能會干擾重組蛋白的功能。

②化學滲透法：化學滲透是指借助跨膜電化學質子梯度來驅動分子逆濃度梯度跨膜的耗能過程，對大腸桿菌的破碎效率很低，進而顯著影響蛋白質的提取。

③機械法：機械法是指借助外部剪切力對大腸桿菌實施物理層面的破壁，直接釋放胞內蛋白。機械法對設備的要求比較高，合適的剪切力才能既破壁又保證蛋白質的生物活性。

高壓均質機有如下優點：

①單支陶瓷柱塞驅動，出料流量可控制。

②變頻流量控制系統，按需流量可調。

③數顯壓力傳感系統，可選配實時壓力曲線監測系統。

④樣品殘留量：零殘留。

實驗案例：

1.準備高壓均質機、冷水機、離心機、根據實驗量取合適的均質機料杯，以及適量桿菌液體。

2.將2根膠管把冷水機的進出水口與主機的出料冷卻器進行連接。

3.將冷水機提前20分鐘打開預冷，溫度設置2度。

4.待冷水機溫度達到實驗均質要求后，往料杯倒入大腸桿菌進行均質，循環次數為5次，壓力為1000bar。

5.完成均質后，將液體放入離心管中進行離心，根據實驗對象進行離心轉速設置，完成離心后取出離心管，即可進行后續實驗。

6.儀器均質完成后，均質機需加清水進行清洗，清洗完畢后，往料杯口加入75度酒精進行封存，防止細菌滋生，以備下次使用。

實驗前

實驗后

離心后

注意事項：

1、嚴禁在無物料的情況下帶壓空運行。

2、設備運行過程中，進料要求穩定、均一、且不可間斷。

3、使用時應盡量避免泵體內吸入空氣。

4、使用結束后，往料杯倒入75%酒精進行封存。

TIPS: 高壓均質機是一款利用高壓泵將物料加壓至一定壓力后，通過均質閥的狹窄縫隙，使物料在高壓下受到剪切、沖擊和空穴效應等作用，從而達到均質、乳化和破碎等目的的設備。具有壓力高、體積小、操作便捷、處理效率高等特點；應用于制藥、生物工程、食品、精細化工等領域。